EMB agar: fundație, pregătire și utilizare

EMB agar este un mediu selectiv și diferențial solid de cultură folosit pentru izolarea bacililor gram-negativi, în principal din familia Enterobacteriaceae, și alte bacili gram-negativi care nu sunt exigenți. Este, de asemenea, cunoscut prin acronimul EAM, ceea ce înseamnă albastru de eozină-metilenă.

Acest mediu a fost creat de Holt-Harris și Teague în 1916. Acesta conține peptonă, lactoză, zaharoză, fosfat dipotasic, agar, eozină, albastru de metilen și apă. Este foarte asemănător agarului MacConkey, mai ales dacă se utilizează agarul EMB modificat de Levine, care nu conține zaharoză.

De fapt, fiecare laborator decide dacă funcționează cu unul sau altul, deoarece acestea îndeplinesc aceeași funcție, deși biochimic ele sunt diferite.

Ea prezintă chiar același dezavantaj ca agarul clasic MacConkey în ceea ce privește producția roșie a genului Proteus. Prin urmare, pentru a evita acest fenomen, concentrația de agar poate fi crescută cu până la 5%.

fundație

selectiv

Agarul EMB este selectiv subtil deoarece conține coloranții anilinici (eozină și albastru de metilen), care acționează ca inhibitori, împiedicând creșterea majorității bacteriilor Gram pozitive și a unor bacterii gram negative Gram negative.

Totuși, acest agar are dezavantajul că unele bacterii gram-pozitive pot rezista prezenței substanțelor inhibitoare și pot crește ca colonii mici, incolore, punctate, cum ar fi Enterococcus faecalis și unele Staphylococcus .

De asemenea, puteți dezvolta anumite drojdii, cum ar fi complexul Candida albicans, care va da colonii foarte mici roz. Inclusiv, pot fi dezvoltate chlamydospores din această drojdie dacă eșantionul este semănat prin adâncime.

diferențială

Pe de altă parte, agarul EMB este, de asemenea, un mediu diferențial, deoarece acești coloranți împreună (eozina și albastrul de metilen) au proprietatea de a forma un precipitat la pH acid, prin urmare ele servesc drept indicatori ai producției sale.

Prin urmare, lactoză sau bacterii de sucroză cu fermentație slabă produc colonii purpurie în 24 până la 48 de ore. De exemplu, genele Klebsiella, Enterobacter și Serratia.

Acele bacterii care fermentează ferm lactoză, cum ar fi Escherichia coli sau sucroză, cum ar fi Yersinia enterocolitica sau Proteus penneri, formează un precipitat negru verzuie, dând un luciu metalic caracteristic acestor specii.

Trebuie remarcat faptul că, dacă se utilizează mediul de levin EMB (fără zaharoză), Yersinia enterocolitica și Proteus penneri vor produce colonii clare.

Bacteriile care nu fermentează lactoza sau sucroza sunt hrănite prin prezența peptonelor, care asigură aminoacizii și azotul necesar dezvoltării bacteriene și produc colonii clare. De exemplu, genurile Salmonella și Shigella, printre altele.

De asemenea, este important de menționat că genul Acinetobacter poate prezenta colonii de albastru de lavandă, chiar dacă nu este un fermentator de lactoză sau zaharoză, dar are proprietatea de a fixa albastrul de metilen în peretele celular. Acest lucru se poate întâmpla și cu alte bacterii oxidative.

preparare

Mediul inițial deshidratat este bej deschis.

Pentru a prepara acest mediu de cultură, 36 g de mediu deshidratat trebuie cântărit și suspendat într-un flacon care conține un litru de apă distilată.

După ce a lăsat amestecul timp de 5 minute în repaus, aduceți fiola la o sursă de căldură, amestecând energic și în mod constant până când se fierbe și se dizolvă complet.

Ulterior, mediul de cultură deja dizolvat trebuie să fie sterilizat folosind autoclava la 121 ° C timp de 15 minute.

La sfârșitul timpului, este îndepărtat din autoclavă și lăsat să se odihnească pentru scurt timp. Apoi se servește chiar și fierbinte (45 - 50 ° C) între 15 și 20 ml de agar în fiecare vas steril Petri. Mediul ar trebui să fie albastru.

După servire, plăcile sunt lăsate puțin descoperite până când agarul se răcește puțin. Apoi sunt acoperite și li se permite să se solidifice complet. Ulterior, acestea sunt comandate într-un suport pentru plăci inversate și depozitate la frigider (8 ° C) până la utilizare.

Această procedură este efectuată, de preferință, într-o capota laminară sau în fața arzătorului Bunsen pentru a evita contaminarea.

Este important să rețineți că fiecare casă comercială va indica cantitatea care trebuie cântărită pentru a pregăti mediul de cultură.

PH-ul final al mediului ar trebui să fie 7, 2 ± 0, 2

aplicații

Acest mediu este utilizat pentru a seca urina și fecalele sau orice tip de probe clinice, în special dacă se suspectează prezența unor bacterii gram-negative negative, cum ar fi bacilii aparținând familiei Enterobacteriaceae, care crește foarte bine în acest mediu.

Bacteriile enteropatogene ale genurilor Shigella și Salmonella se disting prin coloniile lor incolore sau ușor de chihlimbar.

Se dezvoltă, de asemenea, și alte bacili de lactoză fără fermentație, cum ar fi Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, printre altele.

De asemenea, acest mediu este foarte util în analiza microbiologică a alimentelor și a apei, deoarece este ideal pentru faza de confirmare completă a determinării coliformelor, adică pentru a confirma prezența E. coli din bulionul ecologic turbid, de la din tehnica cu numărul cel mai probabil (NMP).

Controlul calității

Pentru a verifica dacă mediul de cultură recent pregătit funcționează bine, tulpinile de control pot fi plantate pentru a observa caracteristicile coloniilor și pentru a verifica conformitatea lor conform așteptărilor.

Pentru aceasta pot fi utilizate tulpini ATCC sau tulpini bine identificate de E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa și unele bacterii Gram pozitive, cum ar fi S. aureus .

Este de așteptat ca E. coli să genereze colonii bine dezvoltate alb-negru cu luciu metalic verde. Întrucât Enterobacter aerogenes și Klebsiella sp trebuie să ofere colonii mucoase bine dezvoltate alb-negru.

Pe de altă parte, Salmonella typhimurium și Shigella flexneri, trebuie să dezvolte colonii mari, incolore sau cu o ușoară culoare galbenă.

În cele din urmă, genul Pseudomonas aeruginosa crește ca colonii incolore de mărime neregulată, în timp ce bacteriile gram-pozitive ar trebui să fie total inhibate sau să crească în mod redus cu colonii foarte mici.

Considerații finale

Uneori, sterilizarea determină reducerea albastrului de metilen, observând un mediu portocaliu. Pentru ca albastrul de metilen să se oxideze și culoarea purpurie să se refacă, trebuie amestecată ușor până când culoarea se recuperează.

De asemenea, după sterilizare, colorantul poate precipita, deci trebuie să fie bine amestecat înainte de servirea vaselor Petri.