Supă Malonato: fundație, preparare și utilizare

Bulionul de malonat este mediul de cultură lichid utilizat pentru testul de diagnosticare (test malonato), folosit pentru a diferenția unele gene de Enterobacteriaceae de familie. A fost creat de Leifson în 1933 și ulterior modificat de Ewing, care a adăugat o cantitate mică de dextroză și extract de drojdie la formula originală.

Mediul este în prezent compus din extract de drojdie, sulfat de amoniu, fosfat dipotasic, fosfat de monopotasiu, clorură de sodiu, malonat de sodiu, dextroză și bromotiromolină. Acest test este de obicei inclus în bateria de identificare biochimică pentru Enterobacteria, ajutând la diferențierea anumitor genuri și specii.

Testul pentru malonat se bazează în principal pe capacitatea unor microorganisme de a utiliza malonatul de sodiu ca singura sursă de carbon și sulfatul de amoniu ca sursă de azot.

Testul malonat este de obicei pozitiv la unele specii din genurile Enterobacter, Klebsiella și Citrobacter. În timp ce majoritatea speciilor din genurile Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus și Providence dau reacții negative.

fundație

Testul malonat constă în demonstrarea acelor bacterii capabile să utilizeze malonatul de sodiu drept singura sursă de carbon și sulfatul de amoniu ca sursă de azot.

Majoritatea enterobacteriilor care nu utilizează malonat sunt capabile să crească în acest mediu, luând ca substanțe nutritive dextroză și extract de drojdie.

În acest caz, orice încercare de alalizare prin utilizarea peptonelor va fi contracarată prin producerea de acizi generați prin fermentarea dextrozei. De asemenea, fosfații dipotalici și monopotasiu acționează ca un tampon menținând pH-ul la 6, 7.

De aceea, atunci când testul este negativ, bulionul are aceeași culoare originală (verde). În cazuri rare, mediul ar putea fi acidificat datorită fermentării dextrozei; fără utilizarea peptonilor și indicatorul de pH ar transforma culoarea mediului în galben. Pentru ca acest lucru să se întâmple, pH-ul trebuie să scadă la 6.

Acum, când acest test este pozitiv, se spune că microorganismul a folosit malonatul și sulfatul de amoniu ca surse de carbon și, respectiv, azot, fără a utiliza celelalte componente.

În acest caz, mediul devine alcalin datorită eliberării de sodiu și formării în consecință a NaOH. În acest sens, indicatorul de pH (albastru de bromotimol) transformă culoarea de la verde la albastru atunci când pH-ul este egal sau mai mare de 7, 6. Albastrul poate fi limpede sau intens (albastru prusac).

În cele din urmă, clorura de sodiu menține osmolaritatea mediului și apa este diluantul tuturor componentelor.

interpretare

Bulion de aceeași culoare (verde): test negativ

Supă de galbenă: test negativ

Lumină albastră sau intensă: dovezi pozitive

Există o variantă numită bulion de fenilalanină malonat, denumită și mediu Shaw și Clarke. În acest caz, pot fi analizate două teste, utilizarea malonatului ca sursă de carbon și producerea de acid piruvic din fenilalanină.

preparare

Supă de Malonato

Cantitatea de grame specificată de inserția casei comerciale alese este cântărită (poate varia de la un la altul). Grame grame sunt suspendate într-un litru de apă distilată. Se încălzește ușor până se dizolvă complet. Distribuiți 3 ml de mediu în 13/100 eprubete cu un capac de bumbac.

Sterilizați într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 sau 20 de minute.

Se răcește înainte de utilizare. Dacă nu se utilizează imediat, depozitați la frigider până la utilizare. Temperați băuturile la temperatura camerei înainte de a le inocula.

PH-ul mediului ar trebui să fie 6, 7 ± 0, 2. Culoarea mediului pregătit este verde.

Flux de malonat de fenilalanină

Se cântăresc 11 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă distilată. Restul preparatului este același cu cel descris mai sus.

Poate fi preparat prin adăugarea a 2 g / l de fenilalanină în mediul de bulion malonat înainte de a fi sterilizată.

utilizare

Este folosit ca parte a bateriei de teste biochimice care sunt asamblate pentru identificarea bacteriilor familiei Enterobacteriaceae.

Ajutați la distincția între:

- genele Klebsiella și Enterobacter (+) din genul Escherichia și Serratia (-).

- Speciile de Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame și Salmonella enterica ssp diarizonae (+) din specia Salmonella enterica ssp enterica (-).

- Din genul Klebsiella în general (+) din genul Actinobacillus (-).

- uneori poate ajuta la diferențierea genurilor și a speciilor de bacterii care nu aparțin familiei Enterobacteriaceae, cum ar fi bacili gram negativi Alcaligenes faecalis (+) și Acinetobacter sp (-).

proces

Sub brichetă, se ia o porțiune dintr-o colonie pură, folosind un mâner din platină sterilizat și răcit corespunzător. Proba luată (inocul ușor) se dizolvă în bulionul de malonat. Se incubează cu capacul liber în aerobioză la 35 ° C ± 0, 2 timp de 24 până la 48 de ore.

Bulionul de malonat poate fi, de asemenea, inoculat dintr-o cultură de 18-24 ore în bulion de soia de trypticază. În acest caz, se administrează 0, 01 ml cu o pipetă sterilă și se inoculează bulionul de malonat. Se incubează cu capacul liber în aerobioză la 35 ° C ± 0, 2 timp de 24 până la 48 de ore.

La sfârșitul timpului, rezultatele sunt interpretate. Orice urme de culoare albastră a culminat după 48 de ore de incubare trebuie considerată pozitivă. Testul nu trebuie interpretat ca negativ până la finalizarea perioadei de incubare de 48 de ore.

În cazul utilizării variantei de bulion de fenilalanină malonat, se interpretează mai întâi malonatul și apoi se adaugă 5 picături de HCI 1 N și 3-5 picături de clorură ferică 8%. O culoare verde închis este interpretată ca un test pozitiv pentru fenilalanină. Dacă, pe de altă parte, mediul se transformă în albastru deschis, testul este negativ pentru fenilalanină.

Controlul calității

Pentru a efectua controlul asupra sterilității mediului, unul sau două bulionuri trebuie incubate la 35 ° C ± 0, 2 timp de 24 de ore de incubare. La sfârșitul acestei perioade nu trebuie să existe turbiditate, nici o schimbare de culoare.

Pentru controlul calității pot fi utilizate tulpini cunoscute sau certificate, cum ar fi: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 și Escherichia coli ATCC 25922.

Rezultatele așteptate sunt:

Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae și Salmonella enterica ssp arizonae dau reacții pozitive (culoare albastră medie).
Pentru Escherichia coli rezultatul trebuie să fie negativ, adică este de așteptat ca nu există nici o schimbare a culorii (verde) sau ca să se transforme în galben datorită fermentării glucozei.